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LLC+luc(小鼠肺癌细胞荧光素酶标记)

货号:AW-CCM523

价格:3000

规格:1*106个

  • 产品概述
  • 细胞描述:

    Lewis肺癌是一种从C57BL小鼠的肺中建立的细胞系,该细胞带有原发性Lewis肺癌的植入所致的肿瘤,被广泛用作转移的模型,可用于研究癌症化学治疗剂的机制。

    该细胞通过慢病毒转染的方式携带Luc基因


    细胞特性:

    1) 来源:小鼠,肺组织

    2) 形态:半贴壁生长,混合形态,有上皮细胞样,松散贴壁或悬浮有梭形、圆形等细胞形态

    3) 规格:1×106cells

    4) 培养条件:MEM+10%FBS+1%P/S (推荐货号AW-MC003)

                           空气,95%;二氧化碳,5%

                           37℃

    5)成瘤性:  C57小鼠或者免疫缺陷鼠,皮下可成瘤。 

    6) 细胞为稳定转染Luc的细胞,随细胞传代次数的增加,其Luc荧光强度会逐渐减弱。若实验要求需要维持荧光强度,可以加入嘌呤霉素进行再次筛选。


    特殊说明此细胞贴壁不牢,生长前期悬浮细胞较多,后期贴壁细胞较多,建议传代和换液时回收培养基中悬浮的细胞。


    细胞接收后的处理:

    1) 收到细胞后,活细胞首先观察培养瓶是否完好,培养液是否漏液,培养基是否浑浊;冻存细胞是否干冰已挥发完,冻存管盖是否脱落,破碎,若有这类情况,请务必拍照记录,并于收货24h内与我们联系。

    2) 细胞处理:

    复苏的细胞:如果是T-25培养瓶活细胞,收到后请用75%的酒精对培养瓶表面进行消毒处理,然后转入培养箱中静置2~3h后再进行后续处理。

    备注:运输用的培养基不宜再次用来培养细胞,请按照说明书新配置完全培养基来培养细胞。  

    冻存细胞:如果是干冰运输的冻存细胞,收到后请立即转入液氮存储或者短暂(24h)放置-80度冰箱保存,或者直接进行细胞复苏。


    细胞复苏、传代及冻存流程参考:

    1、 细胞复苏

    1) 配制完全培养基:基础培养基+胎牛血清+双抗(特殊培养基特殊配置);

    2) 细胞复苏:取5ml完全培养基于15ml离心管中,37℃水浴锅预热,从液氮管(或者-80度冰箱)中快速取出冻存的细胞,放入37℃水浴锅中,摇晃使快速化冻(1min左右),然后将化冻的细胞和预热的培养基,移入超净工作台中,化冻的细胞加入到含预热培养基的15ml离心管中,1000rpm离心5min;

    3) 吸弃上清,得到细胞沉淀,用2ml完全培养基轻轻重悬细胞,加入到T25培养瓶中,做好标记,放入37℃,5%CO2饱和适度培养箱中培养(培养皿复苏效果更好);

    4) 24h后,观察细胞贴壁情况(未贴壁的即为死细胞--针对贴壁细胞),吸弃旧培养基,加入新鲜的预热(室温或37℃)的完全培养基,继续培养。

    2、 细胞传代

    1) 待细胞生长到80%-90%汇合度时,吸弃旧的培养基,加入1ml无菌PBS润洗一次,以去除残余的培养基及血清(血清含有胰酶的抑制因子),然后加入1ml 0.25%胰酶,37℃培养箱中消化(1~2min左右,不同细胞消化时间不同),取出细胞,镜下观察细胞至细胞皱缩变圆;

    2) 加入1ml完全培养基(含FBS)终止消化,轻轻拍打,使细胞脱落下来成单个细胞悬液,收集细胞于15ml无菌离心管中,1000rpm,离心5min;

    3) 收集细胞沉淀,完全培养基重悬,一分为二(可根据细胞生长速度调整比例),分别加入到2个新的培养瓶中,做好标记,放入培养箱中培养。

    3、细胞冻存

    1) 按照细胞传代方法,在超净工作台内消化收集细胞沉淀,取少量细胞用于计数;

    2) 用预冷的1ml冻存液(90%完全培养基+10%DMSO)或者无血清细胞冻存液重悬细胞,加入到1.2ml冻存管中,密度为1*106个/ml。

    3) 放入程序冻存盒,-80℃过夜后,转入液氮长期保存。


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