细胞描述:
细胞转染了表达多瘤病毒中T抗原的NTKmT逆转录病毒载体。观察到血管性血友病因子的表达及对荧光标记的低密度脂蛋白(LDL)的摄入确认其内皮细胞特性。
Bend.3 cells细胞可用细胞因子和脂多糖(LPS)诱导淋巴细胞的Peyer's结高内皮细胞受体,粘膜血管定居因子(MAdCAM-1) 及内皮细胞选择素的表达。肿瘤坏死因子 a(TNF alpha),白介素1(IL-1)或LPS的诱导作用是浓度及时间依赖的。
代数较早的Bend.3细胞未受刺激时在表面表达MAdCAM-1,但过了30代后就不表达了。细胞粘附分子1(ICAM-1)持续表达,并在LPS, IL-1 and TNF a处理后升高。30代前血管细胞粘附分子1(VCAM-1)持续表达,但30代后不表达。
Bend.3细胞中肿瘤坏死因子a(TNF alpha)可以诱导P-选择素的表达,30代后更强。
细胞特性:
1) 来源:BALB/c小鼠,大脑皮层,内皮瘤,内皮多瘤中T抗原转化
2) 形态:内皮细胞样,贴壁生长
3) 规格:1×106cells
4) 培养条件:DMEM(含NaHCO3 1.5g/L)+10%FBS+1%P/S (推荐货号AW-MC006)
空气,95%;二氧化碳,5%
37℃
特殊说明:
a:Bend.3细胞对培养基pH值的任何不平衡都很敏感。
b:使用配方含有3.7g/L碳酸氢钠的DMEM培养基培养细胞时为稳定培养基PH值,增加CO2是必要的,否则这些细胞不会很好地附着或增殖,细胞建议在空气(90%)、CO2(10%)环境中培养。
c:经验证在空气(95%)、CO2(5%)的环境下使用含1.5g/L碳酸氢钠的DMEM培养基会比较好。
细胞接收后的处理:
1) 收到细胞后,活细胞首先观察培养瓶是否完好,培养液是否漏液,培养基是否浑浊;冻存细胞是否干冰已挥发完,冻存管盖是否脱落,破碎,若有这类情况,请务必拍照记录,并于收货24h内与我们联系。
2) 细胞处理:
复苏的细胞:如果是T-25培养瓶活细胞,收到后请用75%的酒精对培养瓶表面进行消毒处理,然后转入培养箱中静置2~3h后再进行后续处理。
备注:运输用的培养基不宜再次用来培养细胞,请按照说明书新配置完全培养基来培养细胞。
冻存细胞:如果是干冰运输的冻存细胞,收到后请立即转入液氮存储或者短暂(24h)放置-80度冰箱保存,或者直接进行细胞复苏。
细胞复苏、传代及冻存流程参考:
1、 细胞复苏
1) 配制完全培养基:基础培养基+胎牛血清+双抗(特殊培养基特殊配置);
2) 细胞复苏:取5ml完全培养基于15ml离心管中,37℃水浴锅预热,从液氮管(或者-80度冰箱)中快速取出冻存的细胞,放入37℃水浴锅中,摇晃使快速化冻(1min左右),然后将化冻的细胞和预热的培养基,移入超净工作台中,化冻的细胞加入到含预热培养基的15ml离心管中,1000rpm离心5min;
3) 吸弃上清,得到细胞沉淀,用2ml完全培养基轻轻重悬细胞,加入到T25培养瓶中,做好标记,放入37℃,5%CO2饱和适度培养箱中培养(培养皿复苏效果更好);
4) 24h后,观察细胞贴壁情况(未贴壁的即为死细胞--针对贴壁细胞),吸弃旧培养基,加入新鲜的预热(室温或37℃)的完全培养基,继续培养。
2、 细胞传代
1) 待细胞生长到80%-90%汇合度时,吸弃旧的培养基,加入1ml无菌PBS润洗一次,以去除残余的培养基及血清(血清含有胰酶的抑制因子),然后加入1ml 0.25%胰酶,37℃培养箱中消化(1~2min左右,不同细胞消化时间不同),取出细胞,镜下观察细胞至细胞皱缩变圆;
2) 加入1ml完全培养基(含FBS)终止消化,轻轻拍打,使细胞脱落下来成单个细胞悬液,收集细胞于15ml无菌离心管中,1000rpm,离心5min;
3) 收集细胞沉淀,完全培养基重悬,一分为二(可根据细胞生长速度调整比例),分别加入到2个新的培养瓶中,做好标记,放入培养箱中培养。
3、细胞冻存
1) 按照细胞传代方法,在超净工作台内消化收集细胞沉淀,取少量细胞用于计数;
2) 用预冷的1ml冻存液(90%完全培养基+10%DMSO)或者无血清细胞冻存液重悬细胞,加入到1.2ml冻存管中,密度为1*106个/ml。
3) 放入程序冻存盒,-80℃过夜后,转入液氮长期保存。