细胞描述:
该细胞来源于54岁白人男性。源于正常成人前列腺周边组织的上皮细胞经过转染HPV-18后建系得到该细胞株。在三维基质胶培养时,在雄激素作用下,RWPE-1细胞形成腺胞并向培养基中分泌PSA(kallikrein 3, KLK3)。来源于RWPE-1的细胞再用Kirstin鼠类肿瘤病毒转染Ki-ras基因,建立了能成瘤的RWPE-2细胞株和 RWPE2-W99细胞株。同时,用N-甲醇-N-硝基脲处理RWPE-1,建立了一系列模拟前列腺癌进程中不同时期的成瘤细胞株,分别是WPE1-NA22, WPE1-NB14, WPE1-NB11和WPE1-NB26细胞株。据提供者报道,RWPE-1细胞株经过检测,乙肝、丙肝、人免疫缺陷病毒都呈阴性。
细胞特性:
1) 来源:人,白人,男性,54岁;前列腺
2) 形态:上皮细胞样,贴壁生长
3) 规格:1×106cells
4) 培养条件: 角质细胞无血清培养基(D-KSFM )+生长因子+P/S(推荐培养基:AW-MC042)
空气,95%;二氧化碳,5%
37℃
特殊说明:
1)细胞在无血清培养体系中培养,其贴壁能力较弱,建议传代后静置24小时再进行后续操作。
2)细胞密度建议保持在4万~7万cells/cm2,接种密度建议在2万~4万活细胞/cm2。
3)使用0.05%胰酶消化细胞。同时由于K-sfm为无血清培养液无法终止胰酶消化,所以消化完成后要通过添加2%FBS(用D-PBS稀释)或等体积的0.1%大豆胰蛋白酶抑制剂终止消化并离心去除胰酶,再进行后续操作。
细胞接收后的处理:
1) 收到细胞后,活细胞首先观察培养瓶是否完好,培养液是否漏液,培养基是否浑浊;冻存细胞是否干冰已挥发完,冻存管盖是否脱落,破碎,若有这类情况,请务必拍照记录,并于收货24h内与我们联系。
2) 细胞处理:
复苏的细胞:如果是T-25培养瓶活细胞,收到后请用75%的酒精对培养瓶表面进行消毒处理,然后转入培养箱中静置2~3h后再进行后续处理。
备注:运输用的培养基不宜再次用来培养细胞,请按照说明书新配置完全培养基来培养细胞。
冻存细胞:如果是干冰运输的冻存细胞,收到后请立即转入液氮存储或者短暂(24h)放置-80度冰箱保存,或者直接进行细胞复苏。
细胞复苏、传代及冻存流程参考:
1、 细胞复苏
1) 配制完全培养基:基础培养基+胎牛血清+双抗(特殊培养基特殊配置);
2) 细胞复苏:取5ml完全培养基于15ml离心管中,37℃水浴锅预热,从液氮管(或者-80度冰箱)中快速取出冻存的细胞,放入37℃水浴锅中,摇晃使快速化冻(1min左右),然后将化冻的细胞和预热的培养基,移入超净工作台中,化冻的细胞加入到含预热培养基的15ml离心管中,1000rpm离心5min;
3) 吸弃上清,得到细胞沉淀,用2ml完全培养基轻轻重悬细胞,加入到T25培养瓶中,做好标记,放入37℃,5%CO2饱和适度培养箱中培养(培养皿复苏效果更好);
4) 24h后,观察细胞贴壁情况(未贴壁的即为死细胞--针对贴壁细胞),吸弃旧培养基,加入新鲜的预热(室温或37℃)的完全培养基,继续培养。
2、 细胞传代
1) 待细胞生长到80%-90%汇合度时,吸弃旧的培养基,加入1ml无菌PBS润洗一次,以去除残余的培养基及血清(血清含有胰酶的抑制因子),然后加入1ml 0.25%胰酶,37℃培养箱中消化(1~2min左右,不同细胞消化时间不同),取出细胞,镜下观察细胞至细胞皱缩变圆;
2) 加入1ml完全培养基(含FBS)终止消化,轻轻拍打,使细胞脱落下来成单个细胞悬液,收集细胞于15ml无菌离心管中,1000rpm,离心5min;
3) 收集细胞沉淀,完全培养基重悬,一分为二(可根据细胞生长速度调整比例),分别加入到2个新的培养瓶中,做好标记,放入培养箱中培养。
3、细胞冻存
1) 按照细胞传代方法,在超净工作台内消化收集细胞沉淀,取少量细胞用于计数;
2) 用预冷的1ml冻存液(90%完全培养基+10%DMSO)或者无血清细胞冻存液重悬细胞,加入到1.2ml冻存管中,密度为1*106个/ml。
3) 放入程序冻存盒,-80℃过夜后,转入液氮长期保存。
1、Effects of icariin and curcumol on autophagy, ferroptosis, and lipid metabolism based on miR-7/m-TOR/SREBP1 pathway on prostate cancer
https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/36585763/
2、Identification of pyroptosis-related lncRNA signature and AC005253.1 as a pyroptosis-related oncogene in prostate cancer
https://www.frontiersin.org/journals/oncology/articles/10.3389/fonc.2022.991165/full
3、Luteolin induces ferroptosis in prostate cancer cells by promoting TFEB nuclear translocation and increasing ferritinophagy
Effects of icariin and curcumol on autophagy, ferroptosis, and lipid metabolism based on miR-7/m-TOR/SREBP1 pathway on prostate cancer
期刊:Biofactors
doi:10.1002/biof.1927
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doi.org/10.3389/fonc.2022.991165