NP-40裂解液

产品介绍：

多种成分均可以从细胞中提取出总蛋白，如Triton、SDS、NP-40等。NP-40裂解液（NP-40 Lysis Buffer）是采用一种温和的裂解方法获得总蛋白的裂解液。所获得的蛋白质可以用于PAGE电泳，Western，免疫沉淀(Immunol Precipitation,IP)和免疫共沉淀(co-IP)等，并含有多种蛋白酶抑制剂成分，可以有效抑制蛋白的降解，并维持原有的蛋白间相互作用。

NP-40 Lysis Buffer主要由Tris-HCl、NaCl、NP-40以及sodium pyropho-sphate，β-glycerophosphate，sodium fluoride，EDTA等多种蛋白酶抑制剂组成。用NP-40 Lysis Buffer得到的蛋白，可以用BCA蛋白定量试剂盒和Bradford蛋白定量试剂盒测定蛋白浓度。

自备材料

1、 不平摇床或侧摆摇床

2、 去离子水（超纯）

3、 乙醇、冰乙酸

使用方法：

（一） 贴壁培养细胞

1、 取NP-40 Lysis Buffer置于室温溶解混匀，加入PMSF，使PMSF终浓度为1mM，或根据实验需要加入适当的蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物。

2、 去除贴壁细胞的培养液，用PBS、NS或无血清培养液清洗1次，低速离心，弃上清，留取沉淀。

3、 按照6孔板每孔加入100~200μl含有PMSF的裂解液的比例，加入NP-40 Lysis Buffer。移液器轻轻吹打，使裂解和细胞充分接触。置于冰上或4℃裂解15~30min，通常裂解液作用于细胞1~3s内，细胞就会被裂解。

4、 10000~12000g，4℃离心5~10min（如无低温离心机，室温下离心亦可），取上清。

5、 进行后续的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

（二） 悬浮培养细胞

1、 取NP-40 Lysis Buffer置于室温溶解混匀，加入PMSF，使PMSF终浓度为1mM，或根据实验需要加入适当的蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物。

2、 低速离心悬浮细胞，弃上清，收集沉淀。

3、 用手指轻弹细胞，使其松散。按照6孔板每孔细胞加入100~200μl含有PMSF的裂解液的比例，加入NP-40 Lysis Buffer。通常6孔板每孔细胞加入150μl裂解液已经足够，但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200~250μl，再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。

4、 10000~12000g，4℃离心5~10min（如无低温离心机，室温下离心亦可），取上清。

5、 进行后续的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

（三） 组织样本

1、 取NP-40 Lysis Buffer置于室温溶解混匀，加入PMSF，使PMSF终浓度为1mM，或根据实验需要加入适当的蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物。

2、 把组织剪切成细小的碎片，越小越好。

3、 取在液氮或超低温冰箱中冷冻30min以上的组织，迅速用液氮研磨，研磨过程尽量控制在1~2min之内，以减少蛋白的降解。

4、 按照每20mg组织加入150~250μl裂解液的比例，加入含有PMSF的裂解液。冰上或4℃裂解30~60min。

5、 步骤3、4亦可以采用如下过程：按照每20mg组织加入150~250μl裂解液的比例，加入含有PMSF的NP-40 Lysis Buffer。用玻璃匀浆器或组织研磨器匀浆，直至充分裂解，过程尽量控制在1~2min之内，心减少蛋白的降解。

6、 10000~12000g，4℃离心5~15min（如无低温离心机，室温下离心亦可），取上清。

7、 进行后续的SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

注意事项：

1、 在贴壁培养细胞的操作步骤中，去除贴壁细胞的培养液后，如果血清中的蛋白没有干扰，可以不用清洗。

2、 如果裂解不充分可以适当增加裂解液的用量，如果需要高浓度的蛋白样品，可以适当减少裂解液的用量。

3、 在培养细胞的裂解中，如果细胞量较多，必需分装成50~100万细胞/离心管，然后再裂解。大团的细胞较难裂解充分，而少量的细胞由于裂解液容易和细胞充分接触，相对比较容易裂解充分。

4、 如果组织样品本身非常细小，可以适当剪切片直接加入裂解液裂解，通过强烈Vortex使样品裂解充分。然后同样离心取上清，用于后续实验。直接裂解的优点是比较方便，不必使用匀浆器，缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。

5、 溶解Cell lysis buffer for Western and IP时，应尽量缩短溶解时间，避免裂解液中的有效成分失效。

6、 细胞裂解的操作步骤，应置于冰上或4℃进行。

7、 为了您的安全和健康，请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。

8、 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

产品组成：